Anopheles (Kerteszia) cruzii é o vetor primário das malárias humana e simiana fora da Amazônia Brasileira e especificamente nas regiões de Mata Atlântica. A presença de casos humanos assintomáticos, macacos silvestres positivos para Plasmodium e a similaridade entre os parasitas que os infectam suportam a discussão se essas infecções podem ser consideradas como zoonoses. Embora muitos aspectos da biologia de An. cruzii já tenham sido abordados, estudos conduzidos durante surtos de transmissão de malária, visando a análise de repasto sanguíneo e infectividade, são ausentes na Mata Atlântica. Este estudo foi conduzido na localidade de Palestina, Juquitiba, Mata Atlântica do Estado de São Paulo, onde anualmente a maioria dos casos humanos autóctones é notificada. Locais em peridomicílio foram selecionados para coleta de mosquitos em um perímetro de até 100 m em torno das residências de casos humanos de malária e da floresta circundante. Os mosquitos foram analisados com o objetivo de identificação molecular das fontes de repasto sanguíneo e para examinar a prevalência de Plasmodium. Um total de 13.441 fêmeas de An. (Ker.) cruzii foi coletado. A taxa de infecção mínima foi calculada a 0,03% e 0,01%, respectivamente, para P. vivax e P. malariae e somente sangue humano foi detectado nos mosquitos analisados que se alimentaram com sangue. Nossos dados reforçam a hipótese de que os portadores humanos assintomáticos são a principal fonte de infecção para os anofelinos na área do peridomicílio, tornando a transmissão zoonótica improvável.

Anopheles (Kerteszia) cruzii has been implicated as the primary vector of human and simian malarias out of the Brazilian Amazon and specifically in the Atlantic Forest regions. The presence of asymptomatic human cases, parasite-positive wild monkeys and the similarity between the parasites infecting them support the discussion whether these infections can be considered as a zoonosis. Although many aspects of the biology of An. cruzii have already been addressed, studies conducted during outbreaks of malaria transmission, aiming at the analysis of blood feeding and infectivity, are missing in the Atlantic Forest. This study was conducted in the location of Palestina, Juquitiba, where annually the majority of autochthonous human cases are notified in the Atlantic Forest of the state of São Paulo. Peridomiciliary sites were selected for collection of mosquitoes in a perimeter of up to 100 m around the residences of human malaria cases. The mosquitoes were analyzed with the purpose of molecular identification of blood-meal sources and to examine the prevalence of Plasmodium. A total of 13,441 females of An. (Ker.) cruzii were collected. The minimum infection rate was calculated at 0.03% and 0.01%, respectively, for P. vivax and P. malariae and only human blood was detected in the blood-fed mosquitoes analyzed. This data reinforce the hypothesis that asymptomatic human carriers are the main source of anopheline infection in the peridomiciliary area, making the probability of zoonotic transmission less likely to happen.

O ciclo eritrocítico do Plasmodium falciparum apresenta uma particularidade em relação às outras espécies de Plasmodium que infectam o homem. Trofozoítas maduros e esquizontes são seqüestrados da circulação periférica devido à adesão de eritrócitos infectados às células endoteliais. Modificações na superfície dos eritrócitos infectados, denominadas "knobs", permitem adesão ao endotélio e a outros eritrócitos. A adesão fornece uma melhor maturação na atmosfera venosa microaerofílica e permite que o parasita escape do clareamento pelo baço, que reconhece a perda de deformabilidade do eritrócito infectado. A adesão ao endotélio ou citoaderência, tem importante função na patogenicidade da doença, causando obstrução de pequenos vasos e contribuindo para danos em muitos órgãos. Citoaderência designa também a adesão de eritrócitos infectados a eritrócitos não infectados, fenômeno amplamente conhecido como "rosetting". Aspectos clínicos da malária grave bem como receptores do hospedeiro e ligantes do parasita envolvidos em citoaderência e "rosetting", são revisados aqui. A proteína de membrana do eritrócito 1 de P. falciparum (PfEMP1) parece ser o principal ligante adesivo dos eritrócitos infectados e será discutida em maiores detalhes. Uma melhor compreensão da função dos receptores do hospedeiro e dos ligantes do parasita no desenvolvimento de diferentes síndromes clínicas é urgentemente necessária para identificar alvos para vacinação visando diminuir as taxas de mortalidade desta doença.

The erythrocytic cycle of Plasmodium falciparum presents a particularity in relation to other Plasmodium species that infect man. Mature trophozoites and schizonts are sequestered from the peripheral circulation due to adhesion of infected erythrocytes to host endothelial cells. Modifications in the surface of infected erythrocytes, termed knobs, seem to facilitate adhesion to endothelium and other erythrocytes. Adhesion provides better maturation in the microaerophilic venous atmosphere and allows the parasite to escape clearance by the spleen which recognizes the erythrocytes loss of deformability. Adhesion to the endothelium, or cytoadherence, has an important role in the pathogenicity of the disease, causing occlusion of small vessels and contributing to failure of many organs. Cytoadherence can also describe adhesion of infected erythrocytes to uninfected erythrocytes, a phenomenon widely known as rosetting. Clinical aspects of severe malaria, as well as the host receptors and parasite ligands involved in cytoadherence and rosetting, are reviewed here. The erythrocyte membrane protein 1 of P. falciparum (PfEMP1) appears to be the principal adhesive ligand of infected erythrocytes and will be discussed in more detail. Understanding the role of host receptors and parasite ligands in the development of different clinical syndromes is urgently needed to identify vaccination targets in order to decrease the mortality rates of this disease.

Embora a gota espessa corada por Giemsa (GTS) permaneça o padrão ouro para o diagnóstico de malária, métodos moleculares são mais sensíveis e específicos para detectar parasitas e podem ser utilizados em centros de referência para avaliar o desempenho da microscopia. A descrição das seqüências dos genes ssrRNA de Plasmodium falciparum, P. vivax, P. malariae e P. ovale permitiu o desenvolvimento de uma reação em cadeia da polimerase (PCR) que tem sido utilizada para diferenciar as quatro espécies. O objetivo deste estudo foi determinar as espécies de Plasmodium através de PCR em 190 lâminas positivas de pacientes para verificar a qualidade do diagnóstico realizado no Laboratório de Malária da SUCEN. Considerando somente os 131 resultados positivos em ambas as técnicas, GTS detectou 4,6% de infecções mistas e 3,1% de P. malariae enquanto o PCR identificou 19,1% e 13,8%, respectivamente.

Although the Giemsa-stained thick blood smear (GTS) remains the gold standard for the diagnosis of malaria, molecular methods are more sensitive and specific to detect parasites and can be used at reference centers to evaluate the performance of microscopy. The description of the Plasmodium falciparum, P. vivax, P. malariae and P. ovale ssrRNA gene sequences allowed the development of a polymerase chain reaction (PCR) that had been used to differentiate the four species. The objective of this study was to determine Plasmodium species through PCR in 190 positive smears from patients in order to verify the quality of diagnosis at SUCEN's Malaria Laboratory. Considering only the 131 positive results in both techniques, GTS detected 4.6% of mixed and 3.1% of P. malariae infections whereas PCR identified 19.1% and 13.8%, respectively.

Marcadores de RAPD são utilizados para a análise de diferenciação genética de Aedes aegypti, pois permitem o estudo do relacionamento genético entre populações. Este estudo procurou identificar populações em diferentes regiões geográficas do Estado de São Paulo visando entender o padrão de infestação do A. aegypti. O dendrograma construído com os dados combinados dos padrões de RAPD mostrou que os mosquitos foram separados em dois grupos principais. Mosquitos da região oeste do Estado de São Paulo constituíram um grupo e o outro grupo foi composto de mosquitos de uma cepa de laboratório juntamente com mosquitos de uma cidade litorânea onde se localiza o maior porto da América Latina. Estes dados concordam com o relato de infestação do Estado de São Paulo. A proximidade genética foi maior entre mosquitos cuja origem geográfica foi mais próxima, entretanto, mosquitos da cidade litorânea foram geneticamente mais próximos aos mosquitos criados em laboratório que àqueles coletados no Estado de São Paulo. A origem da infestação deste local permanece obscura mas certamente está relacionada a mosquitos de origens diferentes daqueles que infestaram a região oeste e norte do Estado na década de 80.

RAPD markers have been used for the analysis of genetic differentiation of Aedes aegypti, because they allow the study of genetic relationships among populations. The aim of this study was to identify populations in different geographic regions of the São Paulo State in order to understand the infestation pattern of A. aegypti. The dendrogram constructed with the combined data set of the RAPD patterns showed that the mosquitoes were segregated into two major clusters. Mosquitoes from the Western region of the São Paulo State constituted one cluster and the other was composed of mosquitoes from a laboratory strain and from a coastal city, where the largest Latin American port is located. These data are in agreement with the report on the infestation in the São Paulo State. The genetic proximity was greater between mosquitoes whose geographic origin was closer. However, mosquitoes from the coastal city were genetically closer to laboratory-reared mosquitoes than to field-collected mosquitoes from the São Paulo State. The origin of the infestation in this place remains unclear, but certainly it is related to mosquitoes of origins different from those that infested the West and North region of the State in the 80's.

Verapamil foi ensaiado quanto ao efeito modulador em isolados brasileiros de Plasmodium falciparum resistentes à cloroquina. Outros agentes cardiovasculares, considerados como moduladores da resistência em malária e/ou em neoplasias multiresistentes a fármacos, como nifedipino, nitrendipino, diltiazem e propranolol foram ensaiados quanto ao mesmo efeito. Concentrações semelhantes às da terapia cardiovascular foram empregadas no ensaio de microtécnica de sensibilidade para fármacos antimaláricos. Atividade antiplasmódica intrínsica foi observada desde as menores concentrações, sem, entretanto, ocorrência de modulação significativa da resistência. Sob as mesmas condições experimentais, respostas semelhantes foram observadas para outros agentes moduladores conhecidos como o antipsicótico trifluoperazina e os antidepressivos desipramina e imipramina. Em conjunto, estes resultados sugerem alta sensibilidade e comportamento indiferente de cepas brasileiras ao efeito de agentes moduladores da resistência.

Verapamil, was assayed to record its modulating effect upon Brazilian Plasmodium falciparum isolates resistant to chloroquine. Other cardiovascular drugs known to be modulating agents in resistant malaria and/or multidrug-resistant neoplasias, including nifedipine, nitrendipine, diltiazem and propranolol, were also evaluated. Concentrations similar to those for cardiovascular therapy were used in the in vitro microtechnique for antimalarial drug susceptibility. Intrinsic antiplasmodial activity was observed from the lowest concentrations without a significant modulating action. Other reported modulating agents, such as the antipsychotic drug trifluoperazine and the antidepressants desipramine and imipramine, demonstrated similar responses under the same experimental conditions. Results suggest a much higher susceptibility of Brazilian strains, as well as an indifferent behaviour in relation to modulating agents.

Phenothiazine drugs - fluphenazine, chlorpromazine, methotrimeprazine and trifluoperazine - were evaluated as modulating agents against Brazilian chloroquine-resistant fresh isolates of Plasmodium falciparum. Aiming to simulate therapeutic schedules, chloroquine was employed at the concentration used for sensitive falciparum malaria treatment and anti-psychotic therapeutic concentrations of the phenothiazine drugs were adopted in two-fold serial dilutions. The in vitro microtechnique for drug susceptibility was employed. Unlike earlier reported data, the phenothiazine modulating effect was not observed. However, all the drugs demonstrated intrinsic antiplasmodial activity in concentrations lower than those described in the literature. In addition, IC50 estimates have been shown to be inferior to the usual anti-psychotic therapeutic concentrations. Statistical analysis also suggested an increase in the parasitaemia rate or, even, a predominant antiparasitic effect of phenothiazine over chloroquine when used in combination.

Este trabalho avaliou o Malar-CheckTM Pf test, ensaio imunocromatográfico que detecta a proteína rica em histidina de Plasmodium falciparum, dispensa uso de equipamentos, é rápido e de fácil execução. Ensaios de diluição com o isolado Palo Alto ou sangue de pacientes com P. falciparum, foram realizados para testar a sensibilidade em diferentes densidades do parasita. Malar-CheckTM foi comparado à gota espessa (GE), padrão ouro para diagnóstico de malária. A média do limiar de sensibilidade para cada técnica em três experimentos independentes foi de 12 e 71 parasitas/mm³ (GE e Malar-CheckTM, respectivamente). Em ensaios de campo, amostras foram coletadas de pacientes febris de áreas endêmicas. Comparado à GE, Malar-CheckTM foi verdadeiramente positivo em 38 pacientes, falso positivo em 3, verdadeiramente negativo em 23 e falso negativo em um. Malar-CheckTMrealizado com sangue de pacientes com P. falciparum após tratamento mostrou persistência do antígeno durante 30 dias. Malar-CheckTM pode ser útil no diagnóstico de P. falciparum em áreas remotas e auxiliar a rotina diagnóstica, mesmo quando a microscopia está disponível. Deve ser considerada infecção pregressa por P. falciparum, que pode determinar testes positivos em indivíduos curados. A rapidez do Malar-CheckTM para o diagnóstico precoce pode evitar evolução para casos graves.

The present study was carried out to evaluate the Malar-CheckTM Pf test, an immunochromatographic assay that detects Plasmodium falciparum Histidine Rich Protein II, does not require equipment, and is easy and rapid to perform. In dilution assays performed to test sensitivity against known parasite density, Malar-CheckTMwere compared with thick blood smear (TBS), the gold standard for diagnosis. Palo Alto isolate or P. falciparum blood from patients with different parasitemias was used. The average cut-off points for each technique in three independent experiments were 12 and 71 parasites/mm³ (TBS and Malar-CheckTM, respectively). In the field assays, samples were collected from patients with fever who visited endemic regions. Compared to TBS, Malar-CheckTMyielded true-positive results in 38 patients, false-positive results in 3, true-negative results in 23, and false-negative result in 1. Malar-CheckTMperformed with samples from falciparum-infected patients after treatment showed persistence of antigen up to 30 days. Malar-CheckTM should aid the diagnosis of P. falciparum in remote areas and improve routine diagnosis even when microscopy is available. Previous P. falciparum infection, which can determine a false-positive test in cured individuals, should be considered. The prompt results obtained with the Malar-CheckTM for early diagnosis could avoid disease evolution to severe cases.

Malária falciparum representa grave e crescente problema de saúde pública mundial, dada a resistência do parasito à maioria dos fármacos disponíveis. Em algumas áreas endêmicas, a quinidina, diastereoisômero do antimalárico quinina, vem sendo empregada em substituição a este último. Com o objetivo de avaliar o emprego da quinidina como alternativa à perda crescente de sensibilidade de cepas brasileiras de P. falciparum à quinina, como o observado na região Amazônica, realizamos ensaio comparativo entre quinidina, quinina e cloroquina. A técnica in vitro do microteste de sensibilidade foi utilizada. Todos os isolados mostraram-se altamente resistentes à cloroquina. Resistência à quinina não foi observada, embora altos valores de CMI (concentração mínima inibitória) tenham sido encontrados. Estes resultados corroboram o decréscimo de suscetibilidade de cepas brasileiras à quinina. Observou-se variação de IC50 de 0,053 a 4,577 mimol/L de sangue para a quinidina, enquanto para a quinina estimou-se IC50 de 0,053 a 8,132 mimol/L de sangue. Ademais, observou-se clareamento da parasitemia em concentrações inferiores à da quinidina quando empregada como fármaco antiarrítmico, confirmando estudo anterior por nós realizado. Resultados semelhantes foram encontrados em isolado oriundo da África.

Falciparum malaria represents a serious and an increasing world public health problem due to the acquired parasite's resistance to the most available drugs. In some endemic areas, quinidine, a diastereoisomer of the antimalarial quinine, has been employed for replacing the latter. In order to evaluate the use of quinidine as an alternative to the increasing loss of quinine effectiveness in Brazilian P. falciparum strains, as has been observed in the Amazon area, we have assayed quinidine, quinine and chloroquine. The in vitro microtechnique was employed. All isolates showed to be highly resistant to chloroquine. Resistance to quinine was not noted although high MIC (minimal inhibitory concentration) values have been observed. These data corroborate the decreasing sensitivity to quinine in strains from Brazil. Quinidine showed IC50 from 0.053 to 4.577 mumol/L of blood while IC50 from 0.053 to 8.132 mumol/L of blood was estimated for quinine. Moreover, clearance of the parasitemia was observed in concentrations lower than that used for quinidine in antiarrhythmic therapy, confirming our previous data. The results were similar to African isolate.

A eritromicina, agente reversor em neoplasias multi-resistentes, foi ensaiada na modulação de malária resistente à cloroquina. Empregou-se a técnica in vitro do microteste de sensibilidade em dois isolados sanguíneos frescos de Plasmodium falciparum oriundos da região Norte do Brasil. Confirmou-se o efeito antimalárico do antibiótico, o qual apresentou valores estimados de IC50 próximos à concentração usualmente empregada na terapia antimicrobiana. No entanto, efeito modulador estatisticamente significativo foi observado em apenas um dos isolados ensaiados.

Erythromycin, a reversal agent in multidrug-resistant cancer, was assayed in chloroquine resistance modulation. The in vitro microtechnique for drug susceptibility was employed using two freshly isolates of Plasmodium falciparum from North of Brazil. The antimalarial effect of the drug was confirmed, with an IC50 estimates near the usual antimicrobial therapy concentration, and a significant statistical modulating action was observed for one isolate.

O presente trabalho teve como objetivo estabelecer critérios adequados à triagem de doadores de sangue de regiões com características epidemiológicas distintas, para malária. Foram estudados 3 locais com critérios de seleção diferentes: São Paulo, SP (sem transmissão vetorial), Belém (baixa transmissão ativa), Matupá, Belém, PA e Peixoto de Azevedo, MT (alta transmissão ativa). A pesquisa de plasmódios foi realizada por gota espessa, QBC Test® e imunofluorescência para pesquisa de antígenos, tendo sido todas as amostras negativas. Houve grande variação na positividade para anticorpos antiplasmodiais por IFI-IgG anti P. vivax e P. falciparum entre doadores aptos nos 3 locais de estudo e entre doadores aptos e inaptos em São Paulo (aptos 1,98%, inaptos 22,3%, p < 0.01) e Belém (aptos 17,2%, inaptos 58,3%, p < 0.01), o que atesta a validade da triagem clínico-epidemiológica realizada. Em Matupá e Peixoto de Azevedo não houve doadores inaptos e a positividade foi de 80,6%. Consideramos que em bancos de sangue a triagem deve seguir critérios clínico-epidemiológicos adequados à situação de cada região. Os métodos laboratoriais de triagem, devem ser para detecção de plasmódios (gota espessa/QBC Test® ou detecção de antígenos parasitários.

The aim of the present work was to establish appropriate criteria for screening of donor blood from regions with distinct Malaria epidemiological characteristics. Three locations with different screening criteria were studied: São Paulo, SP (with no vectorial transmission), Belém, PA (with low active transmission) and Matupá and Peixoto de Azevedo, MT (with high active transmission). The Malaria parasite3/4Plasmodium sp3/4was searched for by "thick film", QBC Test( and antigen Immunofluorescence test, and was not detected in any of the samples. There was, however, a great variation in the positivity of anti-plasmodial antibodies, as determined by IIF-IgG anti-P. vivax and -P. falciparum, between accepted donors in the 3 studied locations and between rejected and accepted donors in São Paulo (1.98% accepted, 22.3% rejected - p < 0.01) and Belém (17.2% accepted, 58.3% rejected - p < 0.01). These data endorse the use of the applied clinical and epidemiological screening. In Matupá and Peixoto de Azevedo, where there was no rejected donor, the serological positivity was 80.6%. We, therefore, consider that the Malaria screening in blood banks should follow clinical and epidemiological criteria suitable to each region. The laboratorial screening techniques should then detect either the parasites (thick film/ QBC Test® or the parasite antigens.